Nucleo per imaging cellulare e molecolare

La missione della struttura principale di imaging cellulare e molecolare (CMI) del centro COBRE di neuroscienze integrative è quella di fornire le infrastrutture e le risorse necessarie per eseguire l'imaging cellulare e molecolare delle biomolecole, nonché la preparazione dei supporti per ulteriori ricerche presso l'Università del Nevada, Reno ( UNR). La struttura principale si trova al terzo piano dell'edificio Fleischmann Lifesciences nel Dipartimento di Biologia del College of Science.

La struttura CMI Core fornisce l'accesso a strumenti all'avanguardia tra cui un nuovo sistema di imaging a due fotoni Scientifica HyperScope per la scansione dei tessuti profondi in cervelli vivi e animali interi, un sistema di microscopio confocale Leica SP8 dotato di un LIGHTNING che consente la cattura di dettagli cellulari e osservare la dinamica con una risoluzione fino a 120 nm, un microscopio verticale Leica Thunder 3D Tissue, uno stereomicroscopio Leica Thunder Model Organism destinato all'acquisizione di immagini di embrioni, organi e piccoli organismi come Drosophila e C. elegans, un GE Phosphoimager per Northern blotting , un BioRad ChemiDoc per Western blotting, due strumenti BioRad Real-Time PCR per PCR precise e quantitative, un QIAgility per la configurazione automatizzata della PCR, uno spettrofotometro GeneSys 180 UV/Vis e un fluorimetro Quibit 4.

Ulteriori funzionalità del nucleo includono strumenti per la preparazione dei terreni e risorse per l'allevamento di Drosophila e C. elegans utilizzati come organismi modello.

Posizione: FA 318 (è richiesto l'accesso con la chiave della porta)

La microscopia a due fotoni è diventata uno strumento indispensabile per le neuroscienze cellulari, consentendo l'imaging fluorescente ad alta risoluzione di cellule cerebrali viventi in vitro e in vivo e animali interi. Il sistema HyperScope è un microscopio a due fotoni personalizzato, dotato di un laser Ti-zaffiro Mai-Tai eHPDS ampiamente sintonizzabile (690-1040 nm), obiettivi multipli (16x, 20x e 40x) e si trova su una breadboard Thorlabs e tavolo antivibrante. Con la telecamera CCD Scientifica SciCam Pro, è possibile eseguire l'imaging funzionale di frame rate video di 24 fps (piena risoluzione) e 40 fps (binned 2 x 2). Il gruppo rilevatore comprende un modulo PMT con spostamento verso il rosso e un modulo PMT GaAsP, nonché imaging in epifluorescenza con set di filtri per GFP (estinzione 470/40x, emissione 525/50 m) e mCherry (estinzione 560/40x, emissione 630/75 m). Gli specchi di scansione nel percorso di imaging possono essere disposti in più configurazioni a seconda delle esigenze. Con un massimo di 3 specchi in serie, è possibile scegliere tra disposizioni galvo/galvo (GG), risonante/galvo (RG) o risonante/galvo/galvo (RGG). Il microscopio è dotato di un azionamento dell'asse Z ultra fluido per garantire un movimento privo di vibrazioni, con l'asse Z controllato con un software per l'acquisizione di stack Z con una dimensione minima del passo di 0,1 mm. L'aggiunta di un posizionatore dell'obiettivo piezoelettrico sull'asse Z consente l'imaging di volumi fino a 400 mm. Il microscopio può essere facilmente configurato e commutato tra applicazioni in vitro e in vivo rimuovendo l'ottica del sottopiano e il blocco montante. Il sistema è racchiuso in una gabbia oscurante per prevenire l'inquinamento luminoso e acustico dei campioni biologici.

Questa piattaforma include il pluripremiato software di acquisizione Scientifica SciScan, che consente agli utenti di integrare facilmente SciScan con applicazioni personalizzate, come LabView e ScanImage. L'interfaccia software ScanImage (Vidrio Technologies) utilizzata da Scientifica è stata sviluppata da HHMI Janelia Farm appositamente per applicazioni neuroscientifiche ed è considerata il software più avanzato per la scansione laser a due fotoni sul mercato.

Le principali caratteristiche uniche di Scientifica HyperScope includono:

Posizione: FA 324

Il confocale Leica TCS SP8 LIGHTNING consente l'estrazione di informazioni sull'immagine con acquisizione a super risoluzione che sfrutta la risoluzione laterale di sub-diffrazione della microscopia confocale. Permette di catturare dettagli cellulari e osservare la dinamica con una risoluzione fino a 120 nm, che è vicina alle capacità del microscopio a super risoluzione STED. Il confocale verticale è in grado di raccogliere simultaneamente da un massimo di 3 canali di rilevamento (due PMT, un HyD) utilizzando più linee laser (diodo 405, blu 488, verde 552, rosso 638 nm). Il confocale è configurato con uno scanner tandem convenzionale (8 kHz), uno stadio super Z-galvo di tipo S, obiettivi multipli (10x, 20x, 25x, 40x, 63x) e poggia su un tavolo antivibrante. Il confocale è collegato a una postazione computer dotata del software Leica LAS-X e di un monitor da 30 pollici.